寡核苷酸片段載體的酶切連接和無縫克隆構(gòu)建方法比較

摘要： 目的 比較酶切連接和無縫克隆方法在構(gòu)建pCGS3-CK載體上的優(yōu)缺點(diǎn)，為寡核苷酸片段載體的構(gòu)建提供參考。方法 酶切連接是需要合成兩條互補(bǔ)的寡聚核苷酸單鏈，然后經(jīng)過退火形成具有黏性末端的雙鏈結(jié)構(gòu)片段，在DNA連接酶的作用下與具有相同酶切的線性化載體連接，形成環(huán)狀質(zhì)粒。無縫克隆是在目標(biāo)序列兩端各加上15～20個(gè)與載體序列同源性的堿基，然后經(jīng)過退火形成雙鏈結(jié)構(gòu)的目的片段，在重組酶的作...