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敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因穩(wěn)定HeLa細(xì)胞株的構(gòu)建

中國(guó)生物制品學(xué)雜志 頁(yè)數(shù)： 5 2018-04-16
摘要： 目的構(gòu)建SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的穩(wěn)定HeLa細(xì)胞株。方法分別設(shè)計(jì)并合成SOSSB1、SOSSB2和SOSSC亞基的兩對(duì)靶向基因特定外顯子的A、B兩個(gè)單導(dǎo)向核酸(single guide RNA,sgRNA)及其互補(bǔ)鏈,與含BbsⅠ黏性末端的PX462載體連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定正確后,分別轉(zhuǎn)染至HeLa細(xì)胞,用2μg/mL的嘌呤霉素培...

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