基于TurboID鄰近蛋白標記技術鑒定細胞內(nèi)Smad3相互作用網(wǎng)絡

摘要： 目的 利用生物素標記酶TurboID介導的鄰近標記技術,篩選并構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子Smad3的活性調(diào)控網(wǎng)絡。方法 構(gòu)建一個含有Smad3和TurboID基因序列的誘導型表達質(zhì)粒,并通過慢病毒介導的轉(zhuǎn)染方法將其導入Smad3敲除的腎小管上皮細胞TCMK1中,形成過表達的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系。在建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系的基礎上,首先確定了適合的生物素標記濃度和時間,隨后進行了生物素標記實驗。通過鏈霉親... （共5頁）