shRNA沉默基因DNMT1的表達對膀胱癌T24細胞增殖與凋亡的影響

摘要： 目的體外研究shRNA(short hairpin RNA)沉默基因DNMT1的表達對膀胱癌T24細胞增殖和凋亡的影響,初步探討DNMT1在膀胱腫瘤形成過程中的作用機制。方法實驗分為空白對照組(給予脂質(zhì)體)、HK組(含無效干擾序列的質(zhì)粒)及pshRNA-DNMT1組;常規(guī)培養(yǎng)膀胱癌T24細胞株,用脂質(zhì)體Lipofectamine 2000將構(gòu)建成功的重組質(zhì)粒pshRNA-DNMT1轉(zhuǎn)染進入T24細胞,然后進行RT-PCR、Western blot檢測各組DNMT1 mRNA及蛋白質(zhì)水平變化;進行MTT、AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法流式細胞術(shù)檢測各組T24細胞增殖和凋亡情況。結(jié)果重組質(zhì)粒pshR-NA-DNMT1成功轉(zhuǎn)染進入膀胱癌T24細胞;經(jīng)RT-PCR檢測pshRNA-DNMT1組DNMT1 mRNA表達減少,24、48、72h的抑制率分別是28.44%、52.48%、70.91%;轉(zhuǎn)染pshRNA-DNMT1后,T24細胞中DNMT1蛋白24、48和72 h的抑制率分別為24.27%、57.79%、69.74%;在MTT檢測中,pshRNA-DNMT1組的細胞增殖抑制率在24、48、72 h分別為(4.34±0.76)%,(9.87±1.54)%和(13.78±1.93)%,與空白對照組比較各時間點差異均有極顯著性意義(均P<0.01);轉(zhuǎn)染24、48和72 h后,pshRNA-DNMT1組細胞凋亡率分別為(3.87±0.81)%、(8.69±1.23)%和(11.46±1.24)%,與空白對照組比較差異均有極顯著性意義(均P<0.01)。結(jié)論重組質(zhì)粒pshRNA-DNMT1能有效降低膀胱癌細胞中DNMT1基因mRNA及蛋白的表達,并在一定程度上抑制T24細胞的增殖和促進凋亡。 （共4頁）