針對ATM基因RNA干擾質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定

摘要： 目的:構(gòu)建針對ATM基因的RNA干擾表達(dá)質(zhì)粒pRiATM,并觀察其抑制SPCA1人肺癌細(xì)胞ATM表達(dá)的效果。方法:構(gòu)建針對ATM基因的短發(fā)夾狀小干擾RNA真核表達(dá)載體pRiATM,并短暫轉(zhuǎn)染SPCA1細(xì)胞,采用熒光定量RT-PCR和Western blotting觀察其抑制SPCA1細(xì)胞ATM表達(dá)的效果。結(jié)果:pRiATM1和pRiATM2轉(zhuǎn)染SPCA1細(xì)胞后,與轉(zhuǎn)染pRiG-FP非特異性對照組相比,ATMmRNA水平分別下降86.4%和77.6%(兩組均P<0.01)。與轉(zhuǎn)染pRiGFP對照組相比,pRi-ATM1組和pRiATM2組ATM蛋白表達(dá)水平分別是對照組的4.3%和10.6%(均P<0.01),以pRiATM1抑制ATM表達(dá)效果最顯著。結(jié)論:pRiATM質(zhì)粒構(gòu)建成功,轉(zhuǎn)染SPCA1細(xì)胞后可以明顯抑制ATM基因的表達(dá)。 （共3頁）