采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選鼻咽癌細胞的甲基化沉默基因

摘要： 為篩選鼻咽癌的甲基化沉默基因,采用二維凝膠電泳(2-DE)技術(shù)分離甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-雜氮-2′-脫氧胞苷(5-aza-2-dC)處理與未處理鼻咽癌細胞5-8F的蛋白質(zhì),PDquest圖像分析軟件識別差異蛋白質(zhì)點,基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)鑒定差異蛋白質(zhì).然后采用Westernblotting和RT-PCR檢測差異蛋白質(zhì)nm23-H1在藥物處理與未處理5-8F細胞中的表達水平,采用甲基化特異性PCR(MS-PCR)檢測nm23-H1基因在藥物處理與未處理5-8F細胞中的甲基化水平.建立了5-aza-2-dC處理與未處理5-8F細胞蛋白質(zhì)的2-DE圖譜,識別了49個差異表達的蛋白質(zhì)點,鑒定了33個差異表達的蛋白質(zhì),其中包括nm23-H1在內(nèi)的15個蛋白質(zhì)在5-aza-2-dC處理后的5-8F細胞中表達上調(diào),而18個蛋白質(zhì)表達下調(diào).Westernblotting和RT-PCR結(jié)果顯示,nm23-H1在5-aza-2-dC處理5-8F細胞后表達上調(diào),MS-PCR結(jié)果顯示,在5-aza-2-dC處理5-8F細胞后nm23-H1基因甲基化水平下降,結(jié)果證實,nm23-H1基因是5-8F細胞中的甲基化沉默基因.15個5-aza-2-dC處理后表達上調(diào)的基因可能是5-8F細胞中的甲基化沉默基因,為篩選鼻咽癌甲基化失活基因提供了科學(xué)依據(jù). （共8頁）