慢病毒載體介導(dǎo)半乳凝素-3-shRNA沉默基因?qū)δ[瘤細(xì)胞的影響

摘要： 目的:構(gòu)建干擾半乳凝素-3(Galectin-3)的重組U6慢病毒質(zhì)粒,體外評價和觀察內(nèi)源性小RNA干擾效果及對細(xì)胞增殖和凋亡的影響.方法:根據(jù)siRNA設(shè)計原則,設(shè)計合成短發(fā)夾DNA,用于體內(nèi)轉(zhuǎn)錄合成干擾Galectin-3編碼序列的發(fā)夾RNA.連接,篩選,酶切,鑒定pGCL-GFP/U6 Gal-3shRNA-1;以含無關(guān)序列發(fā)夾結(jié)構(gòu)的質(zhì)粒載體為對照,感染乳腺癌細(xì)胞系,采用RT-PCR和Western Blot檢測mRNA和蛋白表達(dá)水平與對照組的差別;MTT法和流式細(xì)胞檢測其對細(xì)胞增殖、凋亡的干擾情況.結(jié)果:測序證實重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,體外試驗表明,Galectin-3的mRNA和蛋白表達(dá)均一致降低,轉(zhuǎn)染組為(0.028%),陰性對照組為(0.617%),空白對照組為(0.992%),轉(zhuǎn)染組mRNA干擾效率達(dá)95%(P<0.05);Galectin-3蛋白表達(dá)明顯下調(diào),與陰性對照組和空白對照組相比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05).MTT檢測結(jié)果轉(zhuǎn)染組為(0.40±3.69)%,陰性對照組(0.71±0.16)%;轉(zhuǎn)染組和陰性對照組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05).細(xì)胞凋亡百分率為68.78%.結(jié)論:慢病毒介導(dǎo)的Galectin-3-shRNA成功在體外敲減了腫瘤細(xì)胞的目的蛋白,影響了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展. （共4頁）