利用海藻酸水凝膠構(gòu)建仿肝板肝組織三維共培養(yǎng)模型

摘要： 目的利用海藻酸水凝膠構(gòu)建一種新的肝細(xì)胞三維共培養(yǎng)模型。方法利用海藻酸鈉、微流控芯片,以及肝細(xì)胞C3A和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞EA.hy926制備出海藻酸鈉水凝膠微纖維,實驗組為仿肝板組,同時制備出混合無序水凝膠微纖維作為對照組。利用活細(xì)胞雙熒光標(biāo)記驗證微纖維內(nèi)兩種細(xì)胞排列結(jié)構(gòu),將微纖維培養(yǎng)1周,每天觀察微纖維形態(tài),檢測肝細(xì)胞活力及清蛋白(Alb)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH-L)、α1抗胰蛋白酶(α1AT)、凝血因子Ⅶ(FⅦ)、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶α1(GSTα1)、細(xì)胞色素P450氧化酶1A2(CYP1A2)的水平。結(jié)果仿肝板組水凝膠內(nèi)C3A細(xì)胞在中間,有2~3排,EA.hy926細(xì)胞位于C3A細(xì)胞兩側(cè),呈現(xiàn)肝板結(jié)構(gòu)排布;對照組水凝膠內(nèi)兩種細(xì)胞則混雜在一起呈無序狀態(tài);大約3d肝組織條索形成;兩組水凝膠微纖維直徑隨時間變化差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);仿肝板組肝細(xì)胞活力在第5天達(dá)到最大值,對照組在第6天達(dá)到最大值,兩組除第1天較接近外,其余各天仿肝板組均高于對照組;兩組清蛋白分泌水平變化趨勢基本相同,在第3天達(dá)到最大值,第4天開始下降;仿肝板組ALT、AST、LDH-L在第3天下降到最小值,第4天以后變化趨勢和對照組相同;兩組α1AT除第5天外其余各時間點比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);兩組GSTα1分泌量隨時間持續(xù)上升,仿肝板組各時間點明顯高于對照組(P<0.05);仿肝板組FⅦ分泌量前7d逐漸升高,對照組于第2天持續(xù)下降,仿肝板組第3天開始明顯高于對照組(P<0.05);對照組細(xì)胞內(nèi)CYP1A2水平隨時間變化不明顯,仿肝板組從第4天開始明顯高于對照組(P<0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建出一種仿肝板肝組織三維共培養(yǎng)模型,肝細(xì)胞功能有望得到長時間維持。 （共4頁）