柑橘衰退病晚期抑制差減cDNA文庫的構(gòu)建及初步分析

摘要： 為了研究柑橘衰退病晚期應(yīng)答的分子機理,利用經(jīng)典的抑制差減雜交技術(shù),以感染柑橘衰退病3年后的‘不知火’雜柑實生苗葉片組織的c DNA為測試方,以脫毒的‘不知火’實生苗葉片組織的c DNA為驅(qū)動方進行差減雜交,構(gòu)建了柑橘衰退病誘導(dǎo)的正向抑制差減c DNA文庫。隨機挑取此文庫中210個陽性克隆進行測序,獲得了192條有效序列。將這些EST序列聚類拼接后,共獲得77條非重復(fù)序列。對這些EST進行GO和KEGG分析,發(fā)現(xiàn)這些EST的功能主要與脅迫及防御、代謝、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)運、蛋白命運等途徑相關(guān)。用實時定量RT-PCR驗證了其中4個基因:幾丁質(zhì)酶基因、茉莉酸響應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄抑制因子1基因(JAZ1)、鈣調(diào)素結(jié)合蛋白基因、咖啡酸—氧甲基轉(zhuǎn)移酶基因,結(jié)果表明在衰退病的誘導(dǎo)下,‘不知火’雜柑葉片中這4個基因的表達量均有明顯提高,說明這些基因可能參與了‘不知火’雜柑葉片晚期衰退病應(yīng)答。JAZ1基因的上調(diào)表達表明可能宿主衰退病晚期應(yīng)答過程中的誘導(dǎo)系統(tǒng)抗性受到了抑制。 （共10頁）