雙Bt基因提高青花菜對(duì)菜粉蝶和小菜蛾抗性

摘要： 以青花菜(Brassica oleracea L.ssp.italica)下胚軸為外植體,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法將蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis)晶體毒蛋白基因Cry1Ac和Cry1C分別導(dǎo)入青花菜栽培品種綠彗星中,各獲得35株卡那霉素抗性植株。分別以Cry1Ac和Cry1C特異引物對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行PCR擴(kuò)增,結(jié)果得到27株Cry1Ac陽性植株和13株Cry1C陽性植株。以目的基因Cry1Ac和Cry1C為探針,進(jìn)行Southernblot分析,證明多數(shù)植株目的基因已經(jīng)整合到青花菜基因組中。對(duì)含有單拷貝目的基因植株自交純合后通過有性雜交獲得帶有Cry1Ac和Cry1C雙價(jià)的轉(zhuǎn)基因青花菜。利用RT-PCR檢測(cè)Bt基因在轉(zhuǎn)基因植株中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)不同株系間在RNA水平上存在顯著的表達(dá)差異,部分株系中雙價(jià)Bt同時(shí)得到表達(dá)。ELISA檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株Bt毒蛋白含量為0.12～0.82μg/gFW。結(jié)合室內(nèi)和田間飼蟲試驗(yàn),證明抗蟲效果與Bt毒蛋白表達(dá)水平正相關(guān)。通過多世代選擇,獲得高抗菜粉蝶(Pieris rapae L.)和小菜蛾(Plutella xylostella L.)的純合轉(zhuǎn)基因青花菜材料。雙價(jià)抗蟲基因共同作用,提高了青花菜的抗蟲性。 （共9頁）