利用RNA干擾技術(shù)沉默基因表達(dá)在本科實驗教學(xué)中的設(shè)計與實踐

摘要： RNA干擾是由雙鏈小RNA介導(dǎo)的基因沉默現(xiàn)象,已成為一個被廣泛應(yīng)用的反向遺傳學(xué)研究技術(shù)。為了讓學(xué)生更好地理解該技術(shù),本實驗教學(xué)讓學(xué)生自己選擇靶基因,設(shè)計小干擾RNA和引物,然后檢測小干擾RNA介導(dǎo)的基因沉默效果。以2018年第五組為例,該組挑選了小鼠長鏈脂酰輔酶A合成酶1 (acyl-CoA synthetase long-chain family member 1, Acsl1)為靶基因,設(shè)計了兩對特異性靶向Acsl1 mRNA的小干擾RNA,通過電穿孔的方式將其轉(zhuǎn)染到3T3-L1中,然后提取細(xì)胞總RNA和合成cDNA,最后用相對定量PCR檢測mRNA的表達(dá)量。結(jié)果顯示兩對小干擾RNA都有60%以上的沉默效果。近3年內(nèi),大約83%的學(xué)生都能獨立完成所有實驗并最終成功篩選到至少一對有效的小干擾RNA。該教學(xué)實踐增強了學(xué)生對RNA干擾原理和實驗的理解,鍛煉了學(xué)生的實驗與科研能力。 （共9頁）