赤芝LS基因酵母單雜交文庫構(gòu)建及其上游調(diào)控因子的篩選

摘要： 赤芝羊毛甾醇合酶(lanosterol synthase,LS)是靈芝三萜生物合成甲羥戊酸途徑(mevalonate pathway,MVA途徑)中生成前體化合物——羊毛甾醇的關(guān)鍵酶,LS基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控可直接影響靈芝三萜含量的高低。為了進(jìn)一步研究赤芝MVA途徑關(guān)鍵酶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制,該研究利用酵母單雜交技術(shù),篩選出赤芝LS基因上游的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。提取赤芝全基因組DNA,PCR擴(kuò)增LS啟動子序列。由LS啟動子構(gòu)建誘餌載體,轉(zhuǎn)化Y1H酵母感受態(tài)細(xì)胞構(gòu)建誘餌菌株。運(yùn)用SMART技術(shù)構(gòu)建靈芝酵母單雜交c DNA文庫,再共轉(zhuǎn)化誘餌菌株,經(jīng)同源重組篩選LS基因上游的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。該實(shí)驗(yàn)共篩選出23個(gè)陽性克隆,經(jīng)測序后與全基因組序數(shù)據(jù)庫行blast比對,篩選出LS基因上游的候選調(diào)控因子8個(gè),包括轉(zhuǎn)錄起始因子TFIIB,α/β折疊水解酶超家族、醛脫氫酶超家族、60S核糖體蛋白L21,ATP合成酶β亞基、微管結(jié)合蛋白Cript、蛋白酶體亞基β-1和轉(zhuǎn)醛醇酶。這8個(gè)調(diào)控因子在靈芝三萜生物合成路徑中的調(diào)控作用尚未見報(bào)道,該研究為深入研究LS基因的表達(dá)調(diào)控機(jī)制提供了候選蛋白。 （共7頁）