聚丙烯酰胺凝膠(polyacrylamidegel)是由單體丙烯酰胺(acrylamide,簡稱Acr)和交聯(lián)劑N,N′-甲叉雙丙烯酰胺(N,N′-methylenebisacrylamide,簡稱Bis)在催化劑和加速劑作用下聚合交聯(lián)而成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。(一)聚丙烯酰胺凝膠的合成1.凝膠總濃度...[繼續(xù)閱讀]

    PAGE的種類繁多,如圓盤電泳、不連續(xù)垂直板狀電泳和水平平板電泳。但就其操作而言,卻是大同小異。此處主要討論不連續(xù)垂直板狀凝膠電泳的操作。(一)不連續(xù)垂直板狀凝膠電泳裝置不連續(xù)垂直板狀凝膠電泳裝置通常由穩(wěn)流電泳儀和...[繼續(xù)閱讀]

    一般單向PAGE多用于分離具有活性的生物物質(zhì),而雙向或梯度PAGE則宜用于較難分離鑒定的生物大分子物質(zhì)。如結(jié)合SDS以測定蛋白質(zhì)亞基的分子質(zhì)量;結(jié)合孔梯度進行自然蛋白質(zhì)分子質(zhì)量的測定;加入兩性載體電解質(zhì),可分析蛋白質(zhì)的等電...[繼續(xù)閱讀]

    由于SDS帶有大量的負電荷,消除了蛋白質(zhì)分子之間原有電荷的差異。所以,蛋白質(zhì)的遷移率僅取決于蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量的大小。與已知分子質(zhì)量的標準品比較,可以測定蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量。SDS聚丙烯酰胺凝膠的有效分離范圍,取決于用于...[繼續(xù)閱讀]

    SDS-PAGE操作與上述PAGE的操作大體相似,其不同之處有:1.電泳前的樣品處理按表5-12的配方,配制一定量的二倍樣品緩沖液,在4℃條件下可儲存數(shù)月。每次使用前,樣品與樣品緩沖液以1:1進行混合,煮沸5min,離心,作為點樣用。2.電泳溶液的配...[繼續(xù)閱讀]

    應(yīng)用SDS-PAGE可測定蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量,對蛋白質(zhì)組分進行分離、分析、純化、定性、定量以及少量的制備。相對于超離心、色譜、滲透法等,SDS-PAGE是測定蛋白質(zhì)亞基分子質(zhì)量的一種簡單、經(jīng)濟、快捷的方法。(一)蛋白質(zhì)組分的分離采用...[繼續(xù)閱讀]

    IEF的關(guān)鍵是在凝膠中形成穩(wěn)定的、連續(xù)的線性pH梯度。根據(jù)建立的pH梯度原理的不同,可分為載體兩性電解質(zhì)pH梯度的IEF和固相pH梯度的IEF。前者是將載體兩性電解質(zhì)溶解在電泳介質(zhì)溶液中制膠,形成聚丙烯酰胺或瓊脂凝膠,然后將凝膠引...[繼續(xù)閱讀]

    1.IEF電泳凝膠的制備蒸餾水2.62mL、IEF瓊脂糖0.06g和山梨醇0.76g在沸水浴中加熱約20min至完全溶解,如有殘留顆粒會影響電泳效果。迅速加入尿素1.9g、硫脲0.48g至全溶,輕輕攪拌均勻,然后迅速加入兩性電解質(zhì)(pH3.5～10)(477μL)混勻,放置數(shù)分鐘...[繼續(xù)閱讀]

    利用IEF技術(shù),可對蛋白質(zhì)組分進行分離、分析、純化、定性、定量以及制備,最廣泛應(yīng)用于測定蛋白質(zhì)的等電點。如圖5-13所示,用標準蛋白質(zhì)的等電點(作為縱坐標)對其在IEF中移動的距離(作為橫坐標)作圖,即可得到標準的等電點曲線圖...[繼續(xù)閱讀]

    IEF/SDS-PAGE雙向電泳中通常第一維電泳是IEF,在細管(φ1～3mm)中加入含有兩性電解質(zhì)、8mol/L的尿素以及非離子型去垢劑的聚丙烯酰胺凝膠進行IEF,變性的蛋白質(zhì)根據(jù)其等電點的不同進行分離。在第二維的電泳過程中,結(jié)合SDS的蛋白質(zhì)從等電...[繼續(xù)閱讀]