重組蛋白可在大腸細(xì)菌、酵母、昆蟲和哺乳動物細(xì)胞等體系中得到高效表達(dá),其表達(dá)形式一般可分為:①細(xì)胞外的分泌表達(dá);②細(xì)胞內(nèi)可溶性表達(dá);③細(xì)胞內(nèi)不溶性表達(dá),即產(chǎn)物以包涵體的形式存在。菌體重組蛋白的提取,包括細(xì)胞破碎、...[繼續(xù)閱讀]

    真菌是一類種類繁多、結(jié)構(gòu)多樣的生物,從單細(xì)胞的酵母菌到高度分化的直徑大于1m的大型真菌。真菌中含有大量的蛋白質(zhì),其中蘑菇中蛋白質(zhì)含量占到其干重的31%。因此真菌蛋白質(zhì)的提取,其來源比較廣泛。而且真菌中的一些酶和人類...[繼續(xù)閱讀]

    細(xì)胞由細(xì)胞膜、細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)組成,而細(xì)胞質(zhì)中含有的若干細(xì)胞器和細(xì)胞骨架等,稱為亞細(xì)胞組分。當(dāng)要提取的蛋白質(zhì)存在于亞細(xì)胞組分中時,首先要提取亞細(xì)胞組分,再提取其中的目標(biāo)蛋白質(zhì),這樣可以防止其他細(xì)胞組分中的物質(zhì)對目...[繼續(xù)閱讀]

    植物細(xì)胞除了含有與動物細(xì)胞一樣的細(xì)胞器,如細(xì)胞核、線粒體、核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)外,還有動物細(xì)胞沒有的葉綠體。因此,也和動物細(xì)胞一樣,如果要分離制備分布在這些細(xì)胞器中的蛋白質(zhì),為了防止其他細(xì)胞組分中的物質(zhì)對目的蛋白的干...[繼續(xù)閱讀]

    當(dāng)需要提取的酶存在于富含酚及酚類化合物的植物綠葉、水果和蔬菜組織時,必須除去酚及酚類化合物,否則會影響后面的提取分離工作。酚類化合物在完整的組織和細(xì)胞中是不被氧化的,但是當(dāng)組織破損時,酚類化合物在PPO、單酚氧化...[繼續(xù)閱讀]

    沉淀是溶液中的溶質(zhì)由液相變成固相析出的過程。沉淀法因其具有簡單、經(jīng)濟和濃縮倍數(shù)高的優(yōu)點,而成為分離純化蛋白質(zhì)和酶的常用方法之一。通過沉淀,將目的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)入固相沉淀或留在液相,而與雜質(zhì)得到初步的分離。此方法的...[繼續(xù)閱讀]

    (一)基本原理蛋白質(zhì)等生物大分子物質(zhì)在水溶液中以一種親水膠體形式存在,無外界影響時,呈穩(wěn)定的分散狀態(tài)(如圖3-1)。其主要有兩個原因:一是蛋白質(zhì)為兩性物質(zhì),在一定pH條件下呈現(xiàn)一定的帶電性,因而在水溶液中會因靜電作用而相互...[繼續(xù)閱讀]

    向水溶液中加入一定量親水性的有機溶劑,降低溶質(zhì)的溶解度,使其沉淀析出的分離純化方法,稱為有機溶劑沉淀法。其機理主要有:①親水性有機溶劑加入溶液后降低了介質(zhì)的介電常數(shù),使溶質(zhì)分子之間的靜電引力增加,聚集形成沉淀;②...[繼續(xù)閱讀]

    等電點沉淀的原理:兩性電解質(zhì)在溶液pH處于等電點(pI)時,分子表面靜電荷為零,導(dǎo)致賴以穩(wěn)定的雙電層及水化膜的削弱或破壞,分子間引力增加,溶解度降低,從而相互聚集,沉淀析出。利用等電點除雜蛋白時必須了解制備物對酸堿的穩(wěn)定...[繼續(xù)閱讀]

    將親和試劑加入到含有靶蛋白的混合溶液中,就可以形成親和配體-靶蛋白的共聚物。這種共聚物可以在一定條件下形成沉淀,通過過濾或離心的方式進(jìn)行分離,然后將酶或蛋白質(zhì)從親和配體-聚合物上解離下來。這一過程類似于蛋白質(zhì)的...[繼續(xù)閱讀]