1970—1990年是新離子化技術(shù)迅速發(fā)展的時期。其中的兩個技術(shù)即基質(zhì)輔助激光解離/離子化(MALDI)和電噴霧離子化(ESI)從此被確立了在生物分子質(zhì)譜中的特殊地位。這些離子化的軟方法甚至可以將像蛋白質(zhì)這樣大的生物分子在非解聚的...[繼續(xù)閱讀]

    8.5.1質(zhì)譜分析儀有效和可靠質(zhì)譜分析儀的導(dǎo)入是在生物分析中建立質(zhì)譜的基本原則。在這方面的關(guān)鍵技術(shù)是四極桿分析器、離子阱、時間飛行(TOP)分析儀。TOP質(zhì)譜的工作原理已經(jīng)在20世紀(jì)40年代建立起來;離子阱和四極桿分析器是50年代...[繼續(xù)閱讀]

    多肽含有20個構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸、以肽鍵(酰胺)線性連接在一起。這意味著每一個肽只有一個游離的氨基端和一個游離的羧基端(參見第2章)。習(xí)慣上,肽鏈的順序(無論是用3個字母還是1個字母代表)表示成左邊是N-末端,右邊是C-末端...[繼續(xù)閱讀]

    今天的蛋白數(shù)據(jù)庫涵蓋了來源于不同物種的幾乎2×106蛋白序列。由于生命以進化和保守的方式發(fā)展,實際上已經(jīng)得到的只有一小部分統(tǒng)計上可能的蛋白質(zhì)序列。由于這個原因,要有把握地鑒別蛋白質(zhì)只需要部分序列。當(dāng)未知蛋白質(zhì)被水...[繼續(xù)閱讀]

    電噴霧離子化允許分子質(zhì)量達到數(shù)百單位(ku)的蛋白質(zhì)被轉(zhuǎn)化成為完好的氣體狀態(tài)。這種離子化的蛋白質(zhì)圖譜含有數(shù)個峰[圖8.6(A)],每一個代表了不同帶電狀態(tài)的蛋白質(zhì)。蛋白激酶A催化亞基的納升ESI圖譜[pKa,如圖8.6(A)所示]顯示了23～...[繼續(xù)閱讀]

    大多數(shù)細(xì)胞蛋白在共價或者后翻譯水平上被修飾。共價修飾經(jīng)常發(fā)生在N-末端氨基或者側(cè)鏈氨基酸的半胱氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、精氨酸和天冬氨酸上?？赡艿男揎棌暮唵蔚幕瘜W(xué)修飾(例如甲基化)到形成高度復(fù)合的結(jié)構(gòu)(例如...[繼續(xù)閱讀]

    Aebersold,R.,Goodlett,D.R.2001,Massspectrometryinproteomics,Chem.Rev.101,269-295.Hamdan,M.H.,Righetti,P.G.,Desiderio,D.M.,Nibbering,N,M.2005,ProteomicsToday:ProteinAssessmentandBiomarkersUsingMassSpectrometry,2DElectrophoresis,andMicroarrayTechnology,Wile...[繼續(xù)閱讀]

    脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)可以從活體或者保藏的組織、細(xì)胞、病毒顆?；蛘咂渌麡悠分刑崛∮糜诜治雠c制備。由于打算使用的目的和基因材料的來源變化很大,不存在一個通用的分離方法。盡管如此,在整個生物界中RNA和DNA的...[繼續(xù)閱讀]

    從原核生物、真核生物和病毒之類的生物中提取DNA是從細(xì)胞或病毒殼的解體開始的。解體是通過酶消化、表面活性劑或者機械力來獲得的。當(dāng)從真核生物中提取DNA時,進行細(xì)胞核的分離中間可以去除細(xì)胞器DNA(如線粒體DNA)。根據(jù)需要...[繼續(xù)閱讀]

    與DNA提取相似,RNA的分離是去除像蛋白質(zhì)或者脂類一樣的其他分子。使用有機溶劑將RNA與這些污染物分開。然而,在處理RNA時有幾個方面與DNA不同。多數(shù)細(xì)胞類型在它們的細(xì)胞質(zhì)中與mRNA并存含有大量的RNA酶,它通常是分析提取的關(guān)鍵。...[繼續(xù)閱讀]