Ausubel,F.M.,Brent,R.,Kingston,R.E.etal.2004,CurrentProtocolsinMolecularBiology,Wiley,Hobo-ken....[繼續(xù)閱讀]

    有幾種方法被用于將核酸與其他物質(zhì)分離。色譜(Chromatography,chroma為希臘語(yǔ)中的顏色;graphein表示書寫)是一種物理化學(xué)的方法,利用的是被分離物質(zhì),在兩相中親和力不同的事實(shí),進(jìn)行化合物分離。電泳方法是用電場(chǎng)將物質(zhì)分開。分子到達(dá)...[繼續(xù)閱讀]

    我們現(xiàn)在使用的色譜方法是從Tswent于1903年開發(fā)的程序中衍生而來(lái)。Tswent的程序可以使他能夠用固體吸附劑分離溶解的植物色素。應(yīng)用色譜分離的主要先決條件是,在混合物中含有的待分析物質(zhì),當(dāng)溶解或者蒸發(fā)時(shí)不發(fā)生化學(xué)變化。在...[繼續(xù)閱讀]

    核酸是(多聚)酸類,因此帶負(fù)電,在電場(chǎng)中向正極遷移。分離過程依賴于使用的電壓、膠的性質(zhì)以及被分離分子的電荷和形狀。核酸分離方法的選擇是依據(jù)被分離的分子大小和想要得到的分辨率。使用最頻繁的方法是以下的膠系統(tǒng):瓊脂...[繼續(xù)閱讀]

    Ausubel,F.M.(ed.)1999,CurrentProtocolsinMolecularBiology,Wiley,NewYork.Sambrook,J.,Russel,D.2001,MolecularCloning:ALaboratoryManual,3rdedn,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor.Voet,D.,Voet,J.G.,Pratt,C.W.2004,Biochemistry,3rdedn,JohnWiley&SonsI...[繼續(xù)閱讀]

    正如Watson和Crick在1953年首次描述的那樣,互補(bǔ)的核酸序列形成的雙鏈?zhǔn)钦麄€(gè)生物界基因復(fù)制和表達(dá)的基礎(chǔ)。在鳥嘌呤和胞嘧啶之間的堿基配對(duì)有三個(gè)氫橋參與(G-C對(duì)),而腺嘌呤和胸腺嘧啶之間的配對(duì)有兩個(gè)氫橋參與(A-T對(duì))(圖2.19)。在D...[繼續(xù)閱讀]

    核酸雜交的能力為其定性和制備的可能性開啟了廣闊的空間。重要的特征是在實(shí)驗(yàn)中利用高溫可以將核酸保持在單鏈狀態(tài),當(dāng)冷卻時(shí),它們將識(shí)別和發(fā)現(xiàn)溶液中與之互補(bǔ)的伙伴分子并與其結(jié)合。與互補(bǔ)核酸鏈的結(jié)合是一個(gè)雙分子過程...[繼續(xù)閱讀]

    11.3.1克隆檢測(cè)、Southern印跡、Northern印跡和基因診斷一旦有了克隆或者擴(kuò)增的DNA片段,就可能將放射性或者熒光標(biāo)記貼到特定的核酸探針上。這些探針可以作為雜交探針用來(lái)分析被固定在諸如尼龍或者硝酸纖維素膜上的核酸。早期的事...[繼續(xù)閱讀]

    Clark,M.1996,InSituHybridization:LaboratoryCompanion,Wiley-VCH,Weinheim.Grunstein,M.,Hogness,D.S.1975,Colonyhybridization:amethodfortheisolationofclonesDNAsthatcontainaspecificgene,Proc.Natl.Acad.Sci.USA72(10),3961-3965.Jäger,R.1996,EinfluβdesProto-O...[繼續(xù)閱讀]

    限制性酶是特異性切割核酸序列的內(nèi)切酶(圖12.1)。當(dāng)研究人員想查明細(xì)菌是如何防范病毒入侵者時(shí)發(fā)現(xiàn)了它們。當(dāng)外源DNA被導(dǎo)入細(xì)菌,例如通過噬菌體感染,被限制性酶切割成功能失調(diào)的片段。細(xì)菌的DNA由于限制性酶的識(shí)別位點(diǎn)被甲基...[繼續(xù)閱讀]