Ausubel,F.M.,Brent,R.,Kingston,R.E.etal.2004,CurrentProtocolsinMolecularBiology,Wiley,Hobo-ken....[繼續(xù)閱讀]

    有幾種方法被用于將核酸與其他物質(zhì)分離。色譜(Chromatography,chroma為希臘語中的顏色;graphein表示書寫)是一種物理化學(xué)的方法,利用的是被分離物質(zhì),在兩相中親和力不同的事實(shí),進(jìn)行化合物分離。電泳方法是用電場將物質(zhì)分開。分子到達(dá)...[繼續(xù)閱讀]

    我們現(xiàn)在使用的色譜方法是從Tswent于1903年開發(fā)的程序中衍生而來。Tswent的程序可以使他能夠用固體吸附劑分離溶解的植物色素。應(yīng)用色譜分離的主要先決條件是,在混合物中含有的待分析物質(zhì),當(dāng)溶解或者蒸發(fā)時不發(fā)生化學(xué)變化。在...[繼續(xù)閱讀]

    核酸是(多聚)酸類,因此帶負(fù)電,在電場中向正極遷移。分離過程依賴于使用的電壓、膠的性質(zhì)以及被分離分子的電荷和形狀。核酸分離方法的選擇是依據(jù)被分離的分子大小和想要得到的分辨率。使用最頻繁的方法是以下的膠系統(tǒng):瓊脂...[繼續(xù)閱讀]

    Ausubel,F.M.(ed.)1999,CurrentProtocolsinMolecularBiology,Wiley,NewYork.Sambrook,J.,Russel,D.2001,MolecularCloning:ALaboratoryManual,3rdedn,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor.Voet,D.,Voet,J.G.,Pratt,C.W.2004,Biochemistry,3rdedn,JohnWiley&SonsI...[繼續(xù)閱讀]

    正如Watson和Crick在1953年首次描述的那樣,互補(bǔ)的核酸序列形成的雙鏈?zhǔn)钦麄€生物界基因復(fù)制和表達(dá)的基礎(chǔ)。在鳥嘌呤和胞嘧啶之間的堿基配對有三個氫橋參與(G-C對),而腺嘌呤和胸腺嘧啶之間的配對有兩個氫橋參與(A-T對)(圖2.19)。在D...[繼續(xù)閱讀]

    核酸雜交的能力為其定性和制備的可能性開啟了廣闊的空間。重要的特征是在實(shí)驗(yàn)中利用高溫可以將核酸保持在單鏈狀態(tài),當(dāng)冷卻時,它們將識別和發(fā)現(xiàn)溶液中與之互補(bǔ)的伙伴分子并與其結(jié)合。與互補(bǔ)核酸鏈的結(jié)合是一個雙分子過程...[繼續(xù)閱讀]

    11.3.1克隆檢測、Southern印跡、Northern印跡和基因診斷一旦有了克隆或者擴(kuò)增的DNA片段,就可能將放射性或者熒光標(biāo)記貼到特定的核酸探針上。這些探針可以作為雜交探針用來分析被固定在諸如尼龍或者硝酸纖維素膜上的核酸。早期的事...[繼續(xù)閱讀]

    Clark,M.1996,InSituHybridization:LaboratoryCompanion,Wiley-VCH,Weinheim.Grunstein,M.,Hogness,D.S.1975,Colonyhybridization:amethodfortheisolationofclonesDNAsthatcontainaspecificgene,Proc.Natl.Acad.Sci.USA72(10),3961-3965.Jäger,R.1996,EinfluβdesProto-O...[繼續(xù)閱讀]

    限制性酶是特異性切割核酸序列的內(nèi)切酶(圖12.1)。當(dāng)研究人員想查明細(xì)菌是如何防范病毒入侵者時發(fā)現(xiàn)了它們。當(dāng)外源DNA被導(dǎo)入細(xì)菌,例如通過噬菌體感染,被限制性酶切割成功能失調(diào)的片段。細(xì)菌的DNA由于限制性酶的識別位點(diǎn)被甲基...[繼續(xù)閱讀]